α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)与LDH关系十分密切,实际上它是LDH同工酶Ⅰ型,因其对α-酮丁酸亲合力高,所以当以α-酮丁酸作为底物时,所测LDH的活性特称为α-羟丁酸脱氢酶活性。
α-HBDH测定方法主要有比色法和连续监测法。
- 检查部位:血液血管
- 科室:
- 空腹检查:否
- 禁忌人群:
- 参考价格:¥5
α-羟丁酸脱氢酶——检查细节、注意事项、步骤、结果解读
α-羟丁酸脱氢酶——检查项目的不适宜人群:
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α-羟丁酸脱氢酶——检查项目的注意细节:
(1)比色法:
①Rosalki及Wilkinson建立的α-HBDH测定方法是30℃的连续监测法,以国际单位(U/L)计算。上述方法是37℃比色法,为使各方法间结果有更好的可比性,可转换成30℃连续监测法的相应单位。37℃转换成30℃温度系数为0.87。
②因红细胞内该酶活性高,应在2h内及时分离血清,标本不能溶血。4℃酶活性稳定不少于7天。
③可用EDTA(1mg/ml)、肝素(0.2mg/ml)抗凝血浆,草酸盐、枸橼酸钠、氟化物抗凝剂可抑制该酶活性。
(2)连续监测法:
①此法是1980年由英国临床化学协会(ACB)推荐,其最适底物浓度为15mmol/L(25℃),反应混合物的最终浓度:磷酸盐65.4mmol/L、NADH0.2mmol/L、α-酮丁酸3.3mmol/L,样品容积组分比0.023。改为37℃测定结果与LDH相关性较好。
②α-酮丁酸钠较稳定,α-酮丁酸长期存放,其缩合物可抑制酶促反应。
③国内商品试剂盒的方法,一般是在操作前将α-酮丁酸与NADH溶液混合,置反应温度条件下数分钟后,作为单一试剂取出一定量加入样品中,延迟时间30s后,监测3min。
α-羟丁酸脱氢酶——检查项目的一般步骤:
(1)比色法:按表1进行操作。
混匀,在10~30min内,以490nm波长,光径1cm,蒸馏水调零比色,以AU-AC之差值,查标准曲线得酶活力单位。
(2)连续监测法:
①取血清0.05ml,加入NADH溶液2ml,37℃水浴10~15min,使NADH非特异性氧化完成。
②加入预温至37℃的α-酮丁酸0.1ml充分混合,立即倒入37℃恒温比色杯内监测。340nm波长,1cm光径,空气调零。
③如△A/min>0.08,用磷酸盐缓冲液稀释血清5或10倍后重测。
α-羟丁酸脱氢酶——检查项目结果解读:
(1)比色法:按表1进行操作。
混匀,在10~30min内,以490nm波长,光径1cm,蒸馏水调零比色,以AU-AC之差值,查标准曲线得酶活力单位。
(2)连续监测法:
①取血清0.05ml,加入NADH溶液2ml,37℃水浴10~15min,使NADH非特异性氧化完成。
②加入预温至37℃的α-酮丁酸0.1ml充分混合,立即倒入37℃恒温比色杯内监测。340nm波长,1cm光径,空气调零。
③如△A/min>0.08,用磷酸盐缓冲液稀释血清5或10倍后重测。
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