硫酸锌浊度试验——检查细节、注意事项、步骤、结果解读
硫酸锌浊度试验——检查项目的不适宜人群:
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硫酸锌浊度试验——检查项目的注意细节:
不合宜人群:一般无特殊人群
检查前禁忌:不吃过于油腻、高蛋白食物,避免大量饮酒。以免影响检测结果。
检查时要求:应放松心情,避免因恐惧造成血管的收缩,增加采血的困难。
硫酸锌浊度试验——检查项目的一般步骤:
吸新鲜血清0.1ml,加入麝香草酚巴比妥缓冲液6ml(如血清用半量,缓冲注亦用半量),混和。室温静置30min后,将测定管颠倒混匀数次后,用分光光度计于650nm进行比浊,将比色杯置于比色座的远光电管端。以水校正吸光度到零点,读取各管读数,从标准曲线上查出单位数。
(1)硫酸钡混悬原液的配制,于100ml容量瓶内,加入0.1mol/L硫酸约70ml,冷至10℃,滴加48.1mmol/L氯化钡溶液2.70ml(边滴边摇),再以0.1mmol/L硫酸稀释至刻度。混匀后即成具有麝香草酚浊度20u的原液。
(2)将硫酸钡混悬液配成各种不同浓度的标准比浊液:
(3)用分光光度计于650nm进行比浊,比浊前将管内液体温和地颠倒混和10次,将比色皿置于比色座的远光电管端,以水校正吸光度到零点,读取各管吸光度读数,与其对应的单位数作图,绘成标准曲线。
附注:
(1)配制硫酸钡标准比浊管时注意以下几点:①硫酸试剂的浓度硫酸在反应中虽然是过量的,但当浓度小于0.1mol/L,形成的硫酸钡浊度低;浓度大于0.1mol/L浊度增高。因此,硫酸试剂须严格校正至0.1mol/L。②反应温度:10℃时形成的硫酸钡颗粒细,浊度较高,结果重复性好。25℃、30℃、37℃时形成的颗粒较粗,浊度较低,重复性不易控制。③操作手法:混和方法不同,形成的硫酸钡颗粒大小不同,结果相差很大。所以,每次按规定操作可提高精密度。
(2)麝香草酚缓冲液易变质,但如保存于冰箱中,可因结晶逐渐析出而降低敏感度,故平时使用时,仍应置室温中,如显混浊,即不能用。
(3)麝香草酚应为洁白晶体,如带黄色,须重结晶处理。可按下法重结晶精制:取麝香草酚100g,溶于100ml95%乙醇中,以吸滤漏斗过滤。滤液中加入于100ml冷蒸馏水,混匀。静置20min后吸滤,用冷蒸馏水洗结晶两次,可得到洁白的结晶,置干燥器内待完全干燥后使用。
(4)用巴比妥配制的试剂不能久置,超过2周后,TTT结果有增高趋势,一个月后明显偏高。一般认为此试剂不稳定与巴比妥有关,因为久置后,巴比妥试剂的红外线吸收曲线已有明显变化。本文所介绍麝香草酚-Tris-HCl缓冲液,具有稳定性高,所配TTT试剂放室温至少可保存3个月,且浊度结果受室温变化的影响小。
(5)光电比浊法与光电比色法有所不同,比浊法混浊液除了吸收一部分入射光以外,悬浮的颗粒还能使一部分入射光反射和折射,因此光电池所感受的光除了经过吸收以后的出射光外,还有折射的光,后者不是平行光束,混和液和光电池之间距离越大,则折射光的影响越小。所以在采用72型分光光度计比浊时,比色杯的位置应放在比色杯座的远光电池的一边,可以提高准确度。
(6)麝香草酚缓冲液中麝香草酚含量是影响结果的重要因素之一。浊度单位高低和麝香草酚含量成正比,要求使用25℃的麝香草酚饱和溶液。
硫酸锌浊度试验——检查项目结果解读:
吸新鲜血清0.1ml,加入麝香草酚巴比妥缓冲液6ml(如血清用半量,缓冲注亦用半量),混和。室温静置30min后,将测定管颠倒混匀数次后,用分光光度计于650nm进行比浊,将比色杯置于比色座的远光电管端。以水校正吸光度到零点,读取各管读数,从标准曲线上查出单位数。
(1)硫酸钡混悬原液的配制,于100ml容量瓶内,加入0.1mol/L硫酸约70ml,冷至10℃,滴加48.1mmol/L氯化钡溶液2.70ml(边滴边摇),再以0.1mmol/L硫酸稀释至刻度。混匀后即成具有麝香草酚浊度20u的原液。
(2)将硫酸钡混悬液配成各种不同浓度的标准比浊液:
(3)用分光光度计于650nm进行比浊,比浊前将管内液体温和地颠倒混和10次,将比色皿置于比色座的远光电管端,以水校正吸光度到零点,读取各管吸光度读数,与其对应的单位数作图,绘成标准曲线。
附注:
(1)配制硫酸钡标准比浊管时注意以下几点:①硫酸试剂的浓度硫酸在反应中虽然是过量的,但当浓度小于0.1mol/L,形成的硫酸钡浊度低;浓度大于0.1mol/L浊度增高。因此,硫酸试剂须严格校正至0.1mol/L。②反应温度:10℃时形成的硫酸钡颗粒细,浊度较高,结果重复性好。25℃、30℃、37℃时形成的颗粒较粗,浊度较低,重复性不易控制。③操作手法:混和方法不同,形成的硫酸钡颗粒大小不同,结果相差很大。所以,每次按规定操作可提高精密度。
(2)麝香草酚缓冲液易变质,但如保存于冰箱中,可因结晶逐渐析出而降低敏感度,故平时使用时,仍应置室温中,如显混浊,即不能用。
(3)麝香草酚应为洁白晶体,如带黄色,须重结晶处理。可按下法重结晶精制:取麝香草酚100g,溶于100ml95%乙醇中,以吸滤漏斗过滤。滤液中加入于100ml冷蒸馏水,混匀。静置20min后吸滤,用冷蒸馏水洗结晶两次,可得到洁白的结晶,置干燥器内待完全干燥后使用。
(4)用巴比妥配制的试剂不能久置,超过2周后,TTT结果有增高趋势,一个月后明显偏高。一般认为此试剂不稳定与巴比妥有关,因为久置后,巴比妥试剂的红外线吸收曲线已有明显变化。本文所介绍麝香草酚-Tris-HCl缓冲液,具有稳定性高,所配TTT试剂放室温至少可保存3个月,且浊度结果受室温变化的影响小。
(5)光电比浊法与光电比色法有所不同,比浊法混浊液除了吸收一部分入射光以外,悬浮的颗粒还能使一部分入射光反射和折射,因此光电池所感受的光除了经过吸收以后的出射光外,还有折射的光,后者不是平行光束,混和液和光电池之间距离越大,则折射光的影响越小。所以在采用72型分光光度计比浊时,比色杯的位置应放在比色杯座的远光电池的一边,可以提高准确度。
(6)麝香草酚缓冲液中麝香草酚含量是影响结果的重要因素之一。浊度单位高低和麝香草酚含量成正比,要求使用25℃的麝香草酚饱和溶液。