神经胶质瘤基因治疗的研究进展(3)

3 抑癌基因治疗

原癌基因和抑癌基因都是正常细胞内存在的基因,它们在细胞的生长、分裂、分化和增殖中起着重要的作用。抑癌基因亦称为抗癌基因,是指正常细胞内存在的能抑制细胞转化和肿瘤发生的一类基因群。目前已分离克隆出20 余种抑癌基因,而p53 基因是与人类肿瘤相关性最高的抑癌基因,不少研究也证明肿瘤的生成会伴随p53 的缺失。近几年对于p53的研究也非常热门,Gil2Perotin 等对p53 基因缺陷大鼠中室下区细胞(SVC) 的研究发现,p53 的缺失使作为胶质细胞瘤的起源细胞SVC 增殖迅速。Senatus 等发现一种p53 羧基末端肽,可重新恢复p53 的瘤细胞吞噬作用,而对其他的良性肿瘤及人外周骨髓粒细胞作用较小,由于其可以通过增强的对流释药系统穿越血脑屏障且具有较好的选择性,所以可作为新的抗癌因子。Nashimoto 等则利用p53 腺病毒载体和微热方法,增加了瘤细胞凋亡细胞的比率,而细胞周期分析和DNA 片段含量测定证实细胞抑制只由p53 载体引起。Michiue等使用了基因突变的p53 蛋白,将羧基末端的多赖氨酸残基用精氨酸取代的产物,转导入胶质瘤细胞, 由于存在对Mdm2(鼠双微基因) 介导的遍蛋白化耐受性,这种蛋白具有较强的转导调节活性,同时抑制胶质瘤细胞的增殖,表现了其在p53 基因治疗方面的应用潜力。

这几年有不少的研究转向于p53 在其他基因治疗中的辅助作用,Mitlianga 等观察了复制腺病毒AD5Delta24 和外源p53 在胶质瘤细胞中的同时转运,发现细胞凋亡与细胞p53 状态无关,而腺病毒和p53 的协同凋亡和溶瘤作用促进了瘤细胞的死亡。相对于常规的p53 基因治疗, Ito 等研究的p53促进细胞吞噬的调节基因(PUMA) ,在转导p53 腺病毒载体后,PUMA 促进突变p53 基因对胶质瘤细胞的吞噬作用,却并不诱发对野生p53 基因的胶质瘤细胞凋亡耐受性,实验结果显示了肿瘤特异表达系统中PUMA 的优势。

4 多药耐药( multidrug resistant ,MDR)相关的基因治疗MDR 是指在化学药物治疗肿瘤中发现的肿瘤细胞的非特异普遍耐药性。导致肿瘤细胞的MDR 的一个重要原因,是其MDR1 基因扩增和过度表达。跟MDR 相关的基因治疗一般集中在抑制肿瘤细胞的MDR1 基因表达从而增加常规化疗的效果。Matsumoto 等用一种反义寡核苷酸(RP1) 作用于对依托泊苷耐受的肿瘤细胞, 通过逆转录聚合酶链反应(RT2PCR) 与免疫印记法,发现此反义寡核苷酸可能通过抑制MDR 相关mRNA 的转录从而抑制MDR1 的表达,而与对照组相比,寡核苷酸作用的细胞对依托泊苷的敏感性增加,生长受到抑制。Rittierodt 等通过反义核苷酸作用于人恶性胶质瘤细胞U287MGa 和人脐静脉内皮细胞(HUV2ECC) 细胞来阻止P2gp mRNA的过度表达,结果显示多柔比星在细胞中的驻留时间增加了4 倍;这也反映了反义核苷酸在MDR1 抑制中的广泛使用。郭华等则以MDR21 基因mRNA 为靶点设计合成两反义肽核酸(PNA) 序列,利用PNA2DNA 杂交,阳离子脂质体介导转染神经母细胞瘤耐药细胞株SK2N2SH。采用流式细胞术、RT2PCR 和高效液相色谱等方法分别检测反义PNA的转染效率、转染前后细胞P2gp 、MDR21 基因mRNA 的表达及细胞内阿霉素(ADM) 浓度, 结果显示: 两反义PNA 均使SK2N2SH细胞P2gp 表达明显降低,MDR1 mRNA 表达轻度降低,细胞内ADM聚集浓度明显增加,反义肽核酸在MDR1 基因抑制中的特殊应用,也为逆转肿瘤的MDR 提供了新的途径。