淋病检查，淋病如何诊断鉴别

乐雅养生网导读：本文向您详细介淋病应该做哪些检查，常用的淋病检查项目有哪些。以及淋病如何诊断鉴别，淋病易混淆疾病等方面内容。

淋病常见检查：

常见检查： 淋球菌免疫学检测、 淋菌培养、 淋病细菌学检测

一、检查

实验室检查：

淋球菌实验室检查包括涂片，培养检查淋球菌、抗原检测，药敏试验及PPNG测定，基因诊断。

二、涂片检查：

取患者尿道分泌物或宫颈分泌物，作革兰氏染色，在多形核白细胞内找到革兰氏阴性

双球菌。涂片对有大量脓性分泌物的单纯淋菌性前尿道炎患者，此法阳性率在90%左右，可以初步诊断。女性宫颈分泌物中杂菌多，敏感性和特异性较差，阳性率仅为50-60%，且有假阳性，因此世界卫生组织推荐用培养法检查女病人。慢性淋病由于分泌物中淋球菌较少，阳性率低，因此要取前列腺按摩液，以提高检出率。

咽部涂片发现革兰氏阴性双球菌不能诊断淋病，因为其他奈瑟菌属在咽部是正常的菌群。另外对症状不典型的涂片阳性应作进一步检查。

三、培养检查：

淋球菌培养是诊断的重要佐证，培养法对症状很轻或无症状的男性、女性病人都是较敏感的方法，只要培养阳性就可确诊，在基因诊断问世以前，培养是世界卫生组织推荐的筛选淋病的唯一方法。目前国外推荐选择培养基有改良的Thayer-Martin(TM)培养基和New York City(NYC)培养基。国内采用巧克力琼脂或血琼脂培养基，均含有抗生素，可选择地抑制许多其他细菌生长。在36℃，70%湿度，含5%-10%CO2(烛缸)环境中培养，24-48小时观察结果。培养后还需进行菌落形态，革兰氏染色，氧化酶试验和糖发酵试验等鉴定。培养阳性率男性80%-95%，女性80-90%。

五、其他

1.固相酶免疫试验(EIA)：可用来检测临床标本中的淋球菌抗原，在流行率很高的地区而又不能作培养或标本需长时间远送时使用，可以在妇女人群中用来诊断淋球菌感染。

2.直接免疫荧光试验：通过检测淋球菌外膜蛋白I的单克隆抗体作直接免

疫荧光试验。但目前在男女二性标本的敏感不高，特异性差，加之实验人员的判断水平，故该实验尚不能推荐用来诊断淋球菌感染。

四、基因诊断

1.淋球菌的基因探针诊断

淋球菌的基因探针诊断，所用的探针有：质粒DNA探针，染色体基因探针和rRNA基因探针。

(1)质粒DNA探针

① 隐蔽质粒DNA探针，淋球菌质粒分为三种：接合性质粒，分子最大，为36kb DNA; 耐药性质粒包括两个质粒，DNA长分别为5.6kb和7.1kb;隐蔽质粒4.2kb。其中隐蔽质粒存在于96%的临床淋球菌分离株中，其它奈瑟菌不含有此质粒，故可用它的序列作为特异DNA探针检测淋球菌。Torres采用核酸杂交技术检测淋球菌，所用探针为隐蔽质粒。用该探针对134株淋球菌和131株相关菌株的检测，有124株淋球菌杂交反应阳性，占93%，还可与个别其它的奈瑟菌出现交叉反应，对测定探针的敏感性实验表明可检出102CFU淋球菌。研究证明隐蔽质粒中CPPB基因序列在所有的淋球菌染色体中(包括不含该质粒的菌株)。因此CPPB基因探针具有良好的特异性和敏感性。Torres等用CPPB基因探针检测了201份临床标本， 采用非放射性地高辛标记系统， 其敏感性和特异性分别为95%和98%。

② 耐药性质粒DNA探针

淋球菌的抗药质粒可分为：①产青毒素酶淋球菌(PPNG)其 -内酰胺酶阳性;②具有高水平的质粒介导的耐四环素淋球菌(TRNG)。

PPNG菌株是1976年首次在实验室分离得到的，该菌中含有编码产青毒酶的基因，该基因既可整合于染色体上也可出现在质粒DNA中，而后者居多，称之为产青毒素酶质粒，质粒有二种，大小分别为7.4kb和5.3kb。Pescador1998年设计一特异的检测淋球菌编码 -内酰胺酶基因的探针，采用酶化学发光法标记，液相杂交，用测光计测是特异杂交体的光量。在4h内可检测104-105CFU的PPNG菌株。TRNG菌株虽对四环素耐药，但通常对 -内酰胺酶类及喹诺酮类抗菌素敏感。因此，在实验室药敏检测中可归为敏感细菌。Pescador用抗四环素淋球菌(TRNG)tetm基因的寡核苷酸探针,该基因介导抗四环素,用酶化学发光标记,液相杂交,4h内可直接从临床标本中检出含有tetm基因的1.5 104CFu的淋球菌。

(2)染色体探针

染色体探针包括已知功能的基因探针，如菌毛DNA探针和paI基因探针，这些基因在淋球菌感染人细胞的过程中起着重要作用;未知功能的基因探针，这些探针序列与染色体的特定序列互补，但目前还不知这些基因序列的功能。以上两种染色体探针由于在淋球菌中互补序列的拷贝数较低，检测灵敏度较低，因此一般用的不多，除非有特殊的研究目的。

(3)rRNA基因探针

rRNA基因探针是将与rRNA互补的DNA作为探针，该探针的靶序列是rRNA序列。rRNA的基因探针的特点是：①可以增加探针检测的灵敏度，rRNA基因探针可同时检测rRNA分子和DNA分子;②rRNA具有进化上的保守性;③杂交方法简便、快速;④由于rRNA的含量较高，标本不需增菌。美国Gen-Probe公司生产的淋球菌检测探针PACE C，是以rRNA 及其基因为检测靶序列，采用放射性标记，在2h内可以完成检测，Peter用这种探针检测395个临床标本，结果灵敏度和特异性分别为92.9%，99.4%，他认为PACE C系统筛查临床标本中淋球菌是一个可靠的方法。该探针还可以检测无症状淋球菌感染者，这是目前培养难于达到的。

2、淋球菌的基因扩增检测

上面讲述的探针技术检测淋球菌的方法，虽然比培养方法在灵敏度，特异性和方便性上有了很大的提高，但其仍有一定的局限性，如多数情况下需要标本的淋球菌浓度很高，PCR技术和连接酶链反应的出现进一步提高了检测淋球菌的灵敏性，它具有快速、灵敏、特异、简便的优点，可以直接检测临床标本中极微量的病原体。

(1)淋球菌DNA的提取

①培养菌的DNA提取

将培养得到的淋球菌，以102cfu/ml的浓度溶于碱性裂解液中裂解，裂解液组成为：1M NaCl 1M NaOH和1%Sodium dodecyl sulphate。将裂解液混匀后煮沸1min，然后用100μl 的1M Tris pH7.0中和碱性裂解液。用Tris平衡酚提抽一次，酚 氯仿抽提一次，然后用无水乙醇或异丙醇沉淀DNA，提取的DNA溶于30μl蒸馏水或TE缓冲液中。

②临床棉拭子标本的提取

将贴有分泌物的棉拭子在2ml的无菌生理盐水中或PBS缓冲液中挤压洗1min，以便将标本尽量溶于溶液中，将棉拭子弃去，悬浮液于2-3000r/min离心5min，吸去上清液，细胞重新溶于100μl 1 PCR缓冲液，其中含Tween 20 0.45%,蛋白酶K 200μg/ml，细胞悬浮液于50-60℃温浴1h,然后95℃加热10min以灭活蛋白酶K,12000 r/min离心10min,上清液含DNA模板。

(2)PCR引物的设计

由于淋球菌隐蔽质粒CPPB基因在淋球菌染色体中和4.2kb隐蔽质粒中都有存在，同时在96%的淋球菌中都有该隐蔽质粒，因此很多PCR引物设计在CPPB基因区。

靶基因 引物序列 片段长度(bp)

CPPB NG1 5 GTT TGG CTG GTT GAT TCA AG 3 633

NG2 5 GCA AGA TTT CCG ATTT GGC G 3

CPPB HO1 5 GCT ACG CAT ACC CGC GTT GC 3 390

HO2 5 CGA AGA CCT TCG AGC AGA CA 3

rRNA 引物1 5 -AGG CTG TTG CCA ATA TCG GC-3 206

引物2 5 -ACA CTC GAG TCA CCC AGT TC-3

CPPB GC1 5 CTT ATC GTT TGG CTG GTT GAT TC 3 435

GC2 5 ACC AAG ACC AAA GGT TTG ACA CTG 3

GC3 5 ATT TTC CAG TGT CAA AC 3 241

GC4 5 TAT TCA AGC CCT ATC TG 3

(3)PCR扩增

取淋球菌DNA提取液2μl，加入28μl的反应液中，最终PCR反应液中含dNTP各100μmol/L，引物各0.5μmol/L，TaqDNA聚合酶1U，Mg2+ 1.5mmol/L,加无菌石蜡油30μl，1000r/min离心30s，进行PCR扩增循环，反应条件：94℃变性1min，然后94℃ 30s，57℃1min，72℃1min。共30个循环，最后72℃延伸5min。

扩增产物于2%的琼脂糖凝胶电泳30min，溴化乙锭染色，紫外灯下可见扩增的DNA荧光条带，分子大小应与所用引物扩增靶序列的大小一致。

(4)PCR的灵敏性和特异性

由于CPPB在不含有隐蔽质粒的淋球菌染色体上也会含有CPPB基因，再加96%的淋球菌都会有隐蔽质粒，因此用CPPB作为靶序列的引物具有极高的敏灵性，实验证明，一般传统一步PCR(GC1-GC2)方法可以检出3个淋球菌，而用单管巢式PCR(GC2-GC4)可以检出≤0.3淋球菌(9个CPPB基因)。这些引物经特异性实验，只能扩增淋球菌的DNA，而对非淋球菌奈瑟氏菌扩增不出特异产物。

(5)单管巢式PCR方法

是在传统巢式PCR的基础上将两对PCR引物作特殊的设计，巢式外侧两个引物(GC1，GC2)为25b退火温度比较高(68℃)，巢式内侧两个引物GC3-GC4为17b退火温度较低(46℃)，PCR反应液的其它成分与一般PCR相同。这样，通过控制退火温度(68℃)使外侧引物先行扩增，经过20-30次循环后(第一次PCR)，再降低退火温度(46℃)使内侧引物以第一次PCR产物为模板进行巢式扩增，该PCR的灵敏度可达到检出0.3个淋球菌。

(6)淋球菌连接酶链反应(LCP)检测方法

目前PCR检测淋球菌的方法被广泛地使用。其特异性，灵敏性不断提高。同时另一种基因诊断技术 连接酶链反应(LCP)也以其高特异，高灵敏性被应用于淋球菌的检测中。LCP 与PCR不同之处在于LCP 用四对引物，所用酶是连接酶。连接酶可以将两条相邻引物连接起来。连接起来的两条引物可以作为另两条引物的模板，后者在连接酶作用下连接，又可作为模板，如此进行30-40次循环。LCP所用的模板处理方法与PCR模板制备相等。LCP所用的探针除了可以设计在CPPB基因上，也可以设计在染色体基因序列上，例如opa-1基因。美国Abbott实验室在opa-1基因的48bp长的区域内设计了4个LCP探针，由于opa-1基因在淋球菌的染色体中有11次重复。因此，该组LCP探针具有高灵敏性和特异性。LCP反应过程：

将模板加入LCP反应液中，LCP反应液：20mmol/L Tris-HCl pH7.6;100 mmol/L KCl 10 mmol/L MgCl2;1 mmol/L EDTA; 10 mmol/L NAD+;10 mmol/L DTT,有标记物的两个相邻探针各40fmol/L，未标记的探针各40fmol/L，15U耐热连接酶，反应条件：97℃1s，55℃1s，62℃50s，其40循环。100μl反应产物加入酶标板微孔中，进行显色反应，最后用酶标仪读取光值。根据Buimer的实验证明，LCP在检测男性尿道棉拭子标本的灵敏度为100%，尿液标本为88.9%，女性宫颈棉拭子标本为95.4%。LCP方法的特异性高达100%，这一点明显高于PCR的特异性，避免了假阳性的发生。

3. 临床基因诊断淋球菌的注意事项

目前临床检测淋球菌的基因诊断方法主要采用PCR方法，但是该方法在临床检测中应注意几个问题。

(1)引物设计 除了以上所列的淋球菌PCR引物外，还可从在其它基因上设计，但

是引物序列应具有特异性。因为细菌的染色体较大，许多基因序列并没有搞清楚;同时细菌之间或近或远有一定的同源性，而且细菌所含质粒序列间也存在同源性，因此设计引物一定要进行基因数据库比较分析，同时进行特异性和灵敏性实验，从中选择引物进行临床检测。

(2)临床标本处理 对临床标本来讲，PCR模板要求越纯越好。这就要求在采集标本时要取到准确的位置，对于无症状患者要适当多采样，以保证采集到病原体细菌。另外由于临床标本成分比较复杂，有时简单处理的标本PCR扩增效果并不理想，这可能是由于杂质过多造成的,需要进一步纯化，如用酚一氯仿抽提法纯化，结果将会好转。这种纯化方法比较麻烦,目前已有商品化的DNA纯化试剂盒,可以较简便地从临床标本中提取高纯度的DNA。

(3)PCR产物的检测方法 不久以前临床PCR检测淋球菌几乎都采用电泳的方法进行PCR产物的鉴定。该方法存在许多问题，如由于肉眼观察的主观性而造成假阳性和假阴性的结果。目前用杂交显色法代替电泳法，提高了结果判断的特异性和灵敏性。

总之，PCR方法与LCP方法比传统的培养法在灵敏性和特异性上有了很大的提高，时间也大大缩短。随着基因诊断技术的不断改进。PCR方法与LCP方法在淋球菌的检测将会成为常规的检测方法。

五、药敏试验：在培养阳性后进一步作药敏试验。用纸片扩散法做敏感试验，或用琼脂平皿稀释法测定最小抑菌浓度(MIC)，用以指导选用抗生素。

六、PPNG检测： -内酰胺酶，用纸片酸度定量法，使用Whatman I号滤纸PP-NG

菌株能使其颜色由蓝变黄，阳性为PPNG，阴性为N-PPNG。

以上是对于淋病应该做哪些检查方面内容的相关叙述，下面再来看看淋病应该如何鉴别诊断，淋病易混淆疾病。

淋病如何鉴别？：

一、鉴别

1、与男、女性淋病鉴别的疾病

(1)非特异性尿道炎：常有明显的发病诱因，如插导尿管、尿道探子、泌尿生殖道或邻近器官的炎症等病史。分泌物涂片染色可检出Gram阳性球菌。

(2)NGU：临床症状与淋病类似，但较轻，潜伏期比淋病长，达1～3周，分泌物量少且呈浆液性，排尿困难极少见，无全身症状，取分泌物作检查时常可发现衣原体或支原体。

(3)软下疳：损害一般位于外生殖器部位，发生于尿道口、舟状窝者有脓性分泌物，尿道口红肿和剧痛，溃疡处可检出Ducrey嗜血杆菌。

(4)生殖器疱疹：为HSV引起，损害为集簇性水疱，一般位于外生殖器、肛周，偶见于宫颈，发生于尿道者可有少量分泌物及尿道刺痛或不适，常伴局部烧灼感，疼痛明显，可反复发作。

(5)固定型药疹：有服药或注射用药史，多由磺胺类、巴比妥类、水杨酸盐类或四环素类等引起。常于外生殖器皮肤黏膜交界处发生红斑、水肿、水疱、糜烂及渗出等，伴瘙痒或疼痛，尿道口无红肿及外翻等。

(6)结核性尿道炎：可有尿道刺痛及少量分泌物，但无性接触史，查不到淋球菌，可查见结核杆菌，伴有其他部位结核的症状。

二、与男性淋病鉴别的疾病

(1)包皮龟头炎：常见于包皮过长或包茎者，多由包皮垢刺激及继发化脓菌感染所致，包皮内叶、龟头及冠状沟红肿，有较多的污垢及脓性分泌物，无泌尿道症状及尿道口红肿、流脓等。

(2)尿混浊：尿液呈乳白色，静置后有盐类结晶的沉渣，不伴有自觉症状。

三、与女性淋病鉴别的疾病

(1)念珠菌性阴道炎：外阴及阴道口瘙痒，白带较多，如水样或凝乳状，阴道黏膜红肿、糜烂，可有白膜附着于阴道壁，取白膜涂片镜检可见菌丝及孢子。

(2)滴虫性阴道炎：自觉阴道内有蚁行样瘙痒，阴道分泌物常呈粉红色泡沫状，阴道黏膜多有出血，宫颈可有草莓状突起物和点状出血，阴道分泌物中可检出滴虫。

(3)细菌性阴道病：主要为顽固性白带增多，呈灰白色，非化脓性，并带有"鱼腥样"气味，从阴道分泌物中可检出Gardner杆菌和厌氧菌。

(4)幼女金葡菌性外阴炎：多见于学龄前或学龄期女孩，好发于夏季，外阴、肛周红肿，有脓疱或脓性分泌物、伴疼痛或瘙痒，分泌物涂片可检出Gram阳性球菌。

4、与GPID鉴别的疾病 有急性阑尾炎、感染性流产、盆腔子宫内膜异位症、异位妊娠、卵巢囊肿蒂扭转或破裂等。

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